Protoplastenisolierung

Protoplast herstellen

Wie kann man Protoplasten bei Bakterien herstellen?

• Man löst die Zellwand, die aus einer Mureinschicht besteht, mit EDTA und Lysozym auf (Protoplastenisolation).
• Durch das Fehlen der Zellwand erhält man kugelige Protoplasten.
• Man erhält Protoplasten, wenn kein Murein mehr vorhanden ist.
• Man erhält Sphaeroplasten, wenn noch Reste von Murein vorhanden sind.

Wie kann man Protoplasten bei Pflanzenzellen herstellen?

1. Methode mit Enzymen:
• Man löst die Zellwand, die aus Cellulose besteht, mit Cellulasen auf.
• Man löst die Mittellamellen, die aus Pektin bestehen, mit Pektinasen auf.


2. Methode:
• Man löst Cellulasen, Pektinasen und ein Osmotikum (zumeist Mannit) in destilliertem Wasser in einer Petrischale auf.
• Pflanzenmaterial wird zerkleinert.
• Das Pflanzenmaterial wird auch in die Schale gemacht.
• Das pH-Optimum der Enzyme muss erreicht werden.
• Man wartet eine Zeitlang, unterschiedlich lange, abhängig von der Pflanzenart (Inkubationszeit).
• So erhält man Protoplasten.


3. Methode durch Herausziehen:
• Man macht eine Plasmolyse.
• Man zieht die Protoplasten mit einer Nadel heraus.
• Die Gewinnung von Protoplasten ist mit dieser Methode geringer als die Arbeit mit Enzymen.

Wie kann man Protoplasten bei Pilzen herstellen?

• Man löst die Zellwand, die aus Chitin besteht, mit Chitinase auf (Protoplastenisolation).
• Durch das Fehlen der Zellwand erhält man kugelige Protoplasten.